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談談原代細胞分離實驗的提取步驟！
發(fā)布時間： 2020-12-21 點擊次數(shù)： 2442次原代細胞分離實驗：體外將動物某組織，經(jīng)酶法或機械處理法分離成單細胞，并在合適的培養(yǎng)基中篩選出特定細胞，使得目的細胞得以生存、生長和繁殖。原代細胞分離實驗的提取步驟：1、無菌：確保使用無菌設備、試劑和技術(shù)收集和處理組織。使用個人防護設備以避免污染。使用0.22微米的膜無菌過濾所有酶和試劑。2、切塊：用無菌剪刀或手術(shù)刀將組織標本切成小塊(通:常為2x4mm)，然后將小塊放入選定的緩沖液、培養(yǎng)基或鹽溶液中。3、加酶：將組織清洗三次以消除多余的血液蛋白，然后加入您選擇的酶如膠原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。通常，約0.5 mg/ml~ 1.5mg/ml的酶。4、孵育：將組織樣本在其佳溫度下孵育，通常在37°C下孵育30~ 90分鐘。定期混合或輕輕搖動標本。5、洗滌：通過輕輕移液來分散細胞(也稱為研磨),然后，使用細網(wǎng)過濾細胞懸浮液。讓細胞沉淀并潷出多余的含液酶;洗兩到三次。含有FBS, BSA或其他抑制劑的洗滌溶液也可用于阻止酶消化。6、分析：將細胞重懸于正確的培養(yǎng)基或緩沖液中，然后定量測定細胞產(chǎn)量和活力。這是細胞分離過程中的重要步驟，因此您可以評估解離技術(shù)的結(jié)果。大多數(shù)研究人員使用血細胞計數(shù)器測定細胞產(chǎn)量,并使用臺盼藍重氮染料測量細胞活力。7、培養(yǎng)：這個適合，就可以根據(jù)所分離的細胞來選擇適臺研究的方案和處理步驟來培養(yǎng)細胞了。
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