酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定

實(shí)驗(yàn)過(guò)程

（1）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按照說(shuō)明書(shū)稀釋好五個(gè)梯度，各個(gè)梯度每孔加樣量都為50μL；

（2）加樣：分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μL，然后再加待測(cè)樣品10μL。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻；

（3）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（4）配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

（5）加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外；

（6）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；

（7）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

（8）顯色：每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min；

（9）終止：每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)；

（10）測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15min以?xún)?nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。