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      冷凍保種實驗服務

      冷凍保種實驗服務

      簡要描述:
      冷凍保種實驗服務:冷凍保種(菌種/細胞凍存)是生物實驗室長期保存微生物(細菌、真菌、藻類等)或細胞系的關鍵技術,確保遺傳穩定性和實驗可重復性

      更新時間:2025-06-26

      訪問量:24

      廠商性質:其他

      1. 冷凍保種實驗服務內容概述

      A. 適用樣本類型

      • 微生物:細菌(如大腸桿菌、乳酸菌)、酵母(如畢赤酵母)、絲狀真菌、噬菌體等。

      • 細胞系:哺乳動物細胞(如HEK293、HeLa)、干細胞、原代細胞等。

      • 特殊樣本:難培養微生物(如厭氧菌)、基因編輯菌株(如CRISPR改造菌)。

      B. 服務項目

      項目描述
      標準凍存使用甘油或DMSO凍存液,-80℃或液氮保存。
      優化凍存方案針對脆弱菌種(如支原體)定制凍存保護劑。
      復蘇驗證凍存后復蘇,檢測存活率、污染及功能(如質粒保留、基因表達)。
      庫存管理提供條形碼標簽、電子數據庫記錄(凍存時間、位置、基因型等)。
      快遞運輸干冰或液氮罐運輸凍存管,確保全程低溫。

      2. 冷凍保種實驗服務技術流程

      A. 標準凍存步驟(以大腸桿菌為例)

      1. 前處理

        • 培養至對數生長期(OD600≈0.6-0.8)。

        • 離心收集菌體,去除殘留培養基(避免冷凍損傷)。

      2. 凍存液制備

        • 常用保護劑:15-30%甘油(細菌)或10% DMSO(哺乳細胞)+培養基。

        • 特殊配方:如海藻糖(提高真菌存活率)。

      3. 分裝與標記

        • 分裝至凍存管(推薦1.5 mL螺口凍存管),標注菌株名稱、日期、濃度。

      4. 冷凍程序

        • 梯度降溫:4℃ 30 min → -20℃ 1 h → -80℃長期保存(或直接液氮氣相)。

        • 程序冷凍儀:精確控制降溫速率(如1℃/min,適用于敏感細胞)。

      5. 液氮保存

        • 轉移至液氮罐(氣相:-150℃至-196℃),避免液相中管爆裂。

      B. 復蘇驗證

      1. 快速解凍(37℃水浴,<1 min)。

      2. 涂板或液體培養,檢測:

        • 存活率(CFU計數 vs 凍前)。

        • 遺傳穩定性(PCR驗證目標基因、質粒保留率)。

        • 污染檢測(無抗生素平板培養、16S rRNA測序)。


      3. 關鍵注意事項

      A. 提高存活率的策略

      • 保護劑優化

        • 細菌:甘油濃度需匹配菌種(如乳酸菌需20%甘油+5%脫脂奶粉)。

        • 細胞:血清替代物(如HyClone FBS)減少批次差異。

      • 冷凍速率

        • 快速冷凍(直接-80℃)適合多數細菌,慢速冷凍(程序降溫)適合真核細胞。

      B. 避免常見問題

      問題原因解決方案
      復蘇后無生長保護劑濃度不當或凍存液未混勻重新優化保護劑,渦旋混勻后再凍存。
      細胞破裂冰晶形成(降溫過慢)添加冷凍保護劑(如DMSO),程序降溫。
      污染(真菌/支原體)凍存前樣本不純或操作污染凍存前抗生素處理、PCR檢測。

      4. 用戶常見問題(FAQ)

      Q1:凍存菌種能保存多久?

      • -80℃:細菌通常2-5年,酵母1-3年(定期復蘇驗證)。

      • 液氮:>10年(需避免溫度波動)。

      Q2:如何運輸凍存菌種?

      • 干冰運輸:維持-78℃,適合短期(<3天)。

      • 液氮罐:長期運輸需專業容器(如Taylor-Wharton液氮罐)。

      Q3:凍存后基因會突變嗎?

      • 風險較低,但建議:

        • 保存早期傳代菌株(避免累積突變)。

        • 關鍵菌株備份多管(避免反復凍融)。


      6. 延伸服務

      • 菌種鑒定:16S rRNA測序、MALDI-TOF質譜分析。

      • 專l保藏:協助提交至中國典型培養物保藏中心(CCTCC)或ATCC。


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