產(chǎn)品展示PRODUCTS
ZFNs動(dòng)物模型
更新時(shí)間：2025-08-14
訪問量：160
廠商性質(zhì)：其他
一、ZFNs動(dòng)物模型技術(shù)原理與核心機(jī)制
ZFNs 是第一代可編程基因編輯工具，通過融合 DNA 結(jié)合域（鋅指蛋白）與 DNA 切割域（FokI 核酸酶）實(shí)現(xiàn)靶向編輯：
鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域：
由 30-34 個(gè)氨基酸重復(fù)單元構(gòu)成，每個(gè)單元通過 第 12、13 位可變殘基（RVDs） 識(shí)別特定堿基：
| RVD 類型 | 識(shí)別堿基 | 特異性 |
|---|---|---|
| NI | A | 高 |
| NG | T | 高 |
| HD | C | 高 |
| NN | G/A | 中等 |
單個(gè)鋅指識(shí)別 3 bp，串聯(lián) 3-6 個(gè)可靶向 9-18 bp 序列。
FokI 切割域：
需 二聚化 才能激活切割功能 → ZFNs 需成對(duì)設(shè)計(jì)（左臂/右臂），切割位點(diǎn)位于兩臂結(jié)合位點(diǎn)之間（間隔區(qū) 5-7 bp）。
編輯機(jī)制：
雙鏈斷裂（DSB）→ 細(xì)胞啟動(dòng)修復(fù)路徑：
非同源末端連接（NHEJ） ：隨機(jī)插入/缺失（Indels），導(dǎo)致基因敲除。
同源定向修復(fù)（HDR） ：需外源修復(fù)模板（如 ssODN），實(shí)現(xiàn)點(diǎn)突變或基因插入。
技術(shù)突破：shou次實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物基因組靶向編輯（2005 年），開啟精準(zhǔn)基因編輯時(shí)代 。
二、ZFNs動(dòng)物模型流程與技術(shù)優(yōu)化
（一）標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟
（二）關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)優(yōu)化
| 步驟 | 核心操作 | 創(chuàng)新優(yōu)化 |
|---|---|---|
| 靶點(diǎn)設(shè)計(jì) | 避開高重復(fù)/甲基化區(qū)域，間隔區(qū) 5-7 bp | 軟件預(yù)測(cè)（ZiFiT）提升結(jié)合效率 |
| 鋅指組裝 | 模塊化串聯(lián)法： |
3-6 個(gè)鋅指單元串聯(lián)
Golden Gate 克隆（BsaI/BsmBI） | 6 天完成構(gòu)建，成功率 >80% |
| 表達(dá)載體 | 雙啟動(dòng)子載體（CMV/T7），支持 mRNA 合成與蛋白表達(dá) | 適配多物種（斑馬魚、小鼠、豬） |
| 遞送方式 | - 受精卵顯微注射 ZFNs mRNA體細(xì)胞轉(zhuǎn)染 + 核移植（大型動(dòng)物） | mRNA 遞送減少脫靶 |
| 修復(fù)增強(qiáng) | 聯(lián)合 ssODN 模板 + NHEJ 抑制劑（SCR7） | HDR 效率提升 3 倍 |
三、多物種應(yīng)用案例與模型優(yōu)勢(shì)
（一）典型物種與疾病模型
| 物種 | 靶基因 | 疾病模型 | 效率/表型 | 研究?jī)r(jià)值 |
|---|---|---|---|---|
| 斑馬魚 | golden | 白化病 | 95% F0 代色素缺失 | 發(fā)育基因功能篩選 |
| 小鼠 | Rag2/IL2rg | 免疫缺陷模型 | 雙基因敲除，人源化移植平臺(tái) | 腫瘤免yi治療研究 |
| 豬 | GGTA1 | 異種器guan移植模型 | 敲除 α-Gal 抗原，降低超急性排斥 | 人源化器官開發(fā) |
| 果蠅 | yellow | 體色突變 | 生殖系突變率 5.7%（動(dòng)物模型） | 基因功能保守性驗(yàn)證 |
（二）不可替代性應(yīng)用場(chǎng)景
高 GC 區(qū)域編輯：
無 PAM 序列限制，可靶向 CRISPR/Cas9 無法編輯的區(qū)域 。
低脫靶率需求：
治療性編輯中脫靶率<0.1%（CRISPR 為 1-10%）。
大型動(dòng)物模型：
豬、牛等物種中免疫原性低于 CRISPR 。
